电泳加工又一项运用玩生物与生理上的新技术---双向电泳。这是科学上的一大突然,这与工业上的电泳加工意义与原理都不一样。
蛋白质研究的发展以双向电泳技术作为核心. 双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个i蛋白,并表明蛋白质谱不是稳定的,而是随环境而变化. 双向电泳原理简明,第一向进行等电聚焦,蛋白质沿pH梯度分离,至各自的等电点; 较早期相比,2-DE有两个主要的进步:首先,极高的重复性使有机体的参考图谱,可通过Internet获得,来比较不同组织类型、不同状态的基因表达;其次,高加样量使得2-DE成为一项真正的制备型技术.
1. 配制 12%的丙烯酰胺凝胶。
2. 待凝胶凝固后, 倒去分离胶表面的MilliQ水、 乙醇或水饱和正丁醇,用MilliQ 水冲洗。
3. 配制胶条平衡缓冲液 I
4. 在桌上先放置干的厚滤纸,聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上。将另 一份厚滤纸用 MilliQ水浸湿,挤去多余水分,然后直接置于胶条上,轻轻吸 干胶条上的矿物油及多余样品,这样可以减少凝胶染色时出现的纵条纹。
5. 将胶条转移至样品水化盘中,加入 6ml(17cmIPG)平衡缓冲液 I ,在水平摇床 上缓慢摇晃 15 分钟。
6. 配制胶条平衡缓冲液 II 。
7. 第一次平衡结束后,取出胶条将之竖在滤纸上沥去多余的液体,放入平衡缓 冲液 II 中,继续在水平摇床上缓慢摇晃 15 分钟。
东莞市金达电泳厂主要从事电泳加工,黑色电泳!公司网站:www.jindady.com